Openness and technological innovations in developing countries : evidence from firm-level surveys

The authors analyze the role of international technological diffusion for firm-level technological innovations in several developing countries. Their findings show that, after controlling for firm, industry, and country characteristics, exporting and importing activities are important channels for the diffusion of technology. They also find evidence that the majority of foreign-owned firms are significantly less likely to engage in technological innovations than minority foreign-owned firms or domestic-owned firms. The authors interpret this finding as evidence that the technology transferred from multinational parents to majority-owned subsidiaries is more mature than that transferred to minority-owned subsidiaries. This finding supports the idea that equity joint ventures maximize technology transfers to local firms.Technology Industry,ICT Policy and Strategies,Education for Development (superceded),Innovation,Foreign Direct Investment

The proposed acquisition of Danone by Unilever

The purpose of this dissertation is to propose an acquisition in the Consumer Goods Sector. This Sector has been consistently growing in the last years, and Investment Analysts forecast it as one of the fastest moving in the next years. The proposed companies are Unilever as acquirer and Danone as target. Danone is a unique opportunity for Unilever to acquire a company that has brands loved by million families across countries and a strong pathway for delivering long term sustainable value to the economy and environment. Unilever and Danone have an intrinsic value of €123 046million and €44 507million, respectively. The acquisition would follow a friendly takeover with a bid price of €56 265 million, which represents a 30% premium over the market capitalization of the target as of 29th May 2020. The offer would be 80% cash and 20% equity, financed by cash reserves and the issuance of debt. In term of shares, Unilever would need to issue 242million shares for the acquisition. It is expected that the proposed acquisition yield €13 967million in synergies and deliver €2 208 million value to acquirer shareholders.Esta dissertação tem como objetivo propor uma aquisição no setor de Bens de Consumo. Este setor tem vindo a crescer nos últimos anos, e analistas preveem como um dos setores com maior mudança nos próximos anos. Unilever é a empresa proposta como investidora e Danone como empresa adquirida. Danone é uma oportunidade única para Unilever adquirir uma empresa que tem marcas amadas por milhões de famílias em vários países e um plano forte para criar valor sustentável a longo prazo para a economia e ambiente. Unilever e Danone têm valor intrínseco de €123 046 milhões e €44 507 milhões, respetivamente. A aquisição seguiria uma proposta amigável com uma oferta de €56 265 milhões, que representa um prémio de 30% acima do valor de mercado da empresa adquirida a 29 Maio 2020. A oferta seria em dinheiro e ações, financiada por capital próprio e emissão de dívida. Unilever emitiria 242 milhões de novas ações. Espera-se que a aquisição proposta gere sinergias no valor de €13 967m e crie um valor capturado de €2 208 milhões para os acionistas da Unilever

Engaging socially-vulnerable communities in science: exploring Science&Art approaches

Social inclusion in science is a complex issue. During the past decades, research centres, science centres, museums and other institutions invested in science communication aiming to promote cultural activities to diverse audiences. Despite this investment, science communicators from all over the world face the same challenge: how to reach citizens that are not interested in science? The main goals for this project were to explore innovative techniques to engage socially-vulnerable communities with science, and propose a model of science communication built on this practice-based research. The project, named “Embodying Memories”, was developed in a collaborative way between science partners (IGC - Instituto Gulbenkian de Ciência, iNOVA Media Lab), art partners (museum from FCG – Fundação Calouste Gulbenkian) and administrative partners (Câmara Municipal de Oeiras). The target audience, a senior community of women, most illiterate and migrant from Africa, was involved on the project plan since early stages, starting with the topic choice - Memory. The project implementation consisted of eight sessions that took place over a period of more than two months in 2018, covering several themes related to memory and brain. Diverse formats were used for the session’s activities, from scientific presentations, neuroscience stories or study cases, community memories sharing, to more interactive activities stimulating body movement, abstraction and self-expression. Besides in-door sessions at the migrant support centre, a visit to the FCG museum and a visit to IGC laboratories were organized, and a project public presentation was performed. The project was qualitatively evaluated to identify changes in awareness, knowledge, engagement, attitude and social inclusion, which was made by the analysis of field notes, attendance record, pre/post assessment focus group, community project evaluation, project narrative, and public presentation content. Overall, it was considered that the project had a moderate achievement, from a balance between very high attendance and willingness to participate in new cultural experiences, high engagement with the project, moderate increase in knowledge about neuroscience, and some increase in awareness and engagement with science, stimulation of curiosity, abstraction and self-expression. To achieve a high level of engagement, a dynamic equilibrium was constantly in a trial between the six axes of the project (science education, art education, cultural entertainment, social inclusion, mental health promotion, institutional advertising), and respective institutions. The most important project achievements were the fluidity and fruition of the project itself, and the opportunity given to participants to engage with Science & Art, to visit the museum and laboratories, to meet scientists and science instruments. A relevant asset of the project, was the existence of the boundary spanner, which was developed along pre- and during sessions by taking actions, visits, share experiences and events to inhabit the laboratory sphere, the museum sphere, and the community world. The role of the boundary spanner was crucial, yet challenging to balance between how much would be desirable for each partner to stay in and out of their comfort zones and territories. Based on insights gained from the project development and evaluation, a model was proposed to guide science communication projects using Science & Art approaches to promote social inclusion. The model entails the following phases: Phase 1. Design, plan and collaboration; Phase 2. Implementation; and Phase 3. Evaluation.A inclusão social em ciência é um tema complexo. Todavia tem-se assistido nas últimas décadas a um esforço crescente por parte das instituições de investigação científica, dos centros de ciência, museus, e outras organizações, na promoção de atividades culturais dirigidas a públicos diversificados. Apesar deste investimento, por todo o mundo os comunicadores de ciência deparam-se com o mesmo desafio: como chegar a cidadão que não estão interessados em ciência. Os objetivos principais deste projeto foram a exploração de técnicas inovadoras de envolvimento de comunidades socialmente vulneráveis em ciência e a proposta de um modelo de comunicação de ciência decorrente desta investigação de base-prática. O projeto, denominado “Dar Corpo às Memórias”, desenrolou-se de forma colaborativa entre os parceiros científicos (IGC - Instituto Gulbenkian de Ciência, iNOVA Media Lab), artísticos (museu da FCG – Fundação Calouste Gulbenkian) e administrativos (Câmara Municipal de Oeiras). O público-alvo, uma comunidade sénior de mulheres maioritariamente iletradas e migrantes de África, foi envolvido no projeto desde as fases iniciais, começando na própria escolha do tema – Memória. A fase de implementação do projeto consistiu num conjunto de oito sessões, ao longo de mais de dois meses, durante as quais foram abordados vários temas ligados à memória e ao cérebro. As atividades tiveram natureza diversa desde a apresentação de informação científica, narrativa de histórias da neurociência ou casos de estudo interessantes, partilha de memórias das participantes, até atividades mais interativas de estímulo ao movimento, à abstração e autoexpressão. Além das sessões que decorreram no centro de apoio a migrantes, foram também efetuadas duas visitas (ao museu da FCG e aos laboratórios do IGC) e uma apresentação pública do projeto. O projeto foi qualitativamente avaliado para identificar mudanças de consciencialização, conhecimento, envolvimento, atitude e inclusão social, com recurso à análise das notas de campo, registo de assiduidade, pré/pós grupos de foco, avaliação qualitativa feita pela comunidade, narrativa do projeto feita pela comunidade e conteúdo da apresentação pública. De forma global, considerou-se que o impacto do projeto foi moderado, com níveis de participação e abertura a novas experiências culturais muito elevados, elevado envolvimento com o projeto, moderado aumento de conhecimentos nas áreas das neurociências, e algum aumento de consciencialização, envolvimento com a ciência, estímulo da curiosidade, abstração e autoexpressão. Para atingir elevados níveis de envolvimento, foram efetuadas constantes tentativas de equilíbrio dinâmico entre os seis eixos do projeto (educação científica, educação artística, animação cultural, inclusão social, promoção da saúde mental, publicidade institucional) e respetivas instituições. Os maiores sucessos do projeto foram a sua própria fluidez e fruição e a oportunidade dada às participantes de envolvimento com a ciência e a arte, participação numa visita ao museu e noutra aos laboratórios, o encontro com cientistas e os instrumentos da ciência. Uma mais-valia relevante do projeto foi a existência de uma “boundary spanner” – uma pessoa facilitadora de várias valências - , que se foi desenvolvendo durante as fases pré-sessões e durante as sessões, através de ações, visitas, partilha de experiências e eventos para habitar a esfera do laboratório, a esfera do museu e o universo da comunidade. O papel do “boundary spanner” foi crucial, mas também desafiante, na medida em que requereu uma avaliação do quão cada parceiro estava disponível para permanecer ou sair da sua zona de conforto e territórios. Com base nos conhecimentos ganhos durante o desenvolvimento e avaliação deste projeto, foi proposto um modelo para projetos de comunicação de ciência para a promoção da inclusão social com recurso a abordagens de ciência & arte. O modelo consiste nas seguintes fases: Fase 1. Conceção, planeamento e colaboração; Fase 2. Implementação, e Fase 3. Avaliação

When do startups hire a CEO?

Mestrado em FinançasEste estudo avalia os fatores que levam um fundador a contratar um Director Geral (Gestor Profissional) para a sua empresa. A literatura anterior tem vindo a estudar os Directores Gerais e as startups separadamente, sendo o tema de estudo ignorado. Pretendemos contribuir para a literatura ao pesquisar em que momento as startups decidem contratar um Gestor Profissional e as transformações que daí ocorrerão. A revisão da literatura refere: se as startups contratam ou não um Gestor Profissional, quais os determinantes para o contratar e, por fim, quais as características de um Gestor Profissional. Para esclarecer esta investigação, utilizamos dados recolhidos através de uma entrevista semi-estruturada e complementa-mo-la com fontes secundárias. A nossa amostra inclui startups incubadas na região de Lisboa, que contrataram um Gestor Profissional ou que permaneceram com os fundadores iniciais no papel de CEO (Gestor Fundador). A nossa principal conclusão indica que o Gestor Fundador tem habilidades de liderança incomparáveis e ao ser crucial na vida de uma startup, a longo prazo, as empresas geralmente permanecem com estes no papel de Director Geral.This study evaluates the factors that drive a founder to hire a Chief Executive Officer (Professional CEO) for its start-up. Previous literature have studied CEOs and start-ups, separately, being the study topic itself ignored. We aim to contribute to the literature by researching in which moment the startups decide to hire a Professional CEO and the transformations that from there will occur. The literature review refers to: startups hire or not a Professional-CEO, which are the determinants to hire him/her and finally, which are the characteristics of a Professional-CEO. To enlighten this investigation, we use data collected through a semi-structured interview and complement it with secondary sources. Our sample includes startups incubated in the region of Lisbon, which hired a Professional CEO or remained with the initial founders in the role of CEO (Founder-CEO). Our major findings indicate that as Founder-CEO have unmatched leadership skills and are crucial in the life of a startup, in the long-term, the ventures usually remain with them in the role of Chief Executive Officers.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Biosynthesis and purification of DNA vectors as therapeutic approaches against Human Papillomavirus infection

Cervical cancer is one of the leading causes of death amongst women, especially in countries lacking suitable access to health and hygiene care. Contrarily to most cancers, which usually take origin in mutations related with the action of mutagenic or carcinogenic agents, the development of cervical cancer is strongly associated with infection by Human Papillomavirus (HPV). This virus is responsible for the expression of E6 and E7 oncoproteins, which interfere with the cell cycle regulation, affecting the cellular mechanisms of repair and proliferation of infected cells. In the last decades, DNA-based therapies, such as DNA vaccines or gene therapy, have been highly explored by researchers in the search of an efficient non-viral vector for the cervical cancer treatment. Plasmid DNA (pDNA) is a popular non-viral vector, which has been widely studied in the past decades for the development of a variety of DNA vaccines and gene therapy strategies. However, the presence of CpG motifs necessary to its amplification in prokaryotic hosts may lead to the activation of the immune system and to the degradation of this molecule before it can reach the target cells, in a gene therapy perspective. However, these same motifs may contribute to the recognition of this bioproduct by antigen presenting cells, facilitating the processing of pDNA as a DNA vaccine. Minicircle DNA (mcDNA) consists in a non-viral vector whose popularity has been largely increasing in the last years. This vector results from the recombination of a molecule, which is similar to conventional pDNA, named parental plasmid (PP). However, PP presents two recombination sites which, upon induction, give origin to the recombination of this molecule into two different molecules: one containing all the prokaryotic information necessary for PP amplification in prokaryotic hosts (miniplasmid – mP) and another containing all the information necessary for the therapeutic gene expression in eukaryotic cells (mcDNA). Considering its innovative character, it is crucial to develop suitable strategies for mcDNA preparation, with a purity that fits the requirements established by regulatory agencies such as European Medicines Agency (EMA) or Food and Drug Administration (FDA). Thus, this work was performed with two different perspectives regarding cervical cancer treatment, namely DNA vaccines and gene therapy. Firstly, concerning DNA vaccines, the application of an adequate purification strategy allowed to understand that the purity degree of the pDNA sample can significantly contribute for the increased expression of the target antigen. The application of a monolith modified with arginine ligands, comparatively to the use of commercially available techniques, allowed to retrieve a final DNA vaccine sample with higher supercoiled (sc) content, leading to a higher expression of the target proteins. Concomitantly, the development of nanocarriers composed by calcium carbonate and gelatin allowed the delivery of pDNA vaccine to dendritic cells, also known as antigen presenting cells, without detecting cytotoxicity. On the other hand, two different strategies for mcDNA purification were explored. Firstly, the preparation of a monolith modified with cadaverine ligands and its use in the purification of sc mcDNA allowed a recovery yield of 78.6% coupled with 98.4% purity. These results turned out to be very interesting considering the current mcDNA purification scenario in the literature. On the other side, size exclusion chromatography was also explored through the use of Sephacryl SF-1000 matrix. This strategy allowed to obtain a sc mcDNA yield of 66% alongside a purity of 98.35%. Despite 12 times more mass of pure sc mcDNA was obtained in one assay, the assay turned out to be approximately 8 times longer than the assays performed with the cadaverine modified monolith. In the end, two strategies were developed for sc mcDNA purification, each presenting its advantages and disadvantages. Nonetheless, both allowed the purification of mcDNA without resorting to PP specific genetic modifications, which implies that these strategies can be universally used for mcDNA purification. However, the need to implement an analytical methodology that allows to quantify sc mcDNA content in a fast, low cost and effective way led to the study of cadaverine-modified monolith with this purpose. Thus, a chromatographic method was implemented and validated to quantify sc mcDNA concentration present in a complex or pure sample, within a range of 1-25 μg/mL. Lastly, to study the effectiveness of miR-375 in the treatment of cervical cancer, in vitro studies were performed to evaluate the effect displayed by mcDNA-pri-miR-375 in the expression of E6 an E7 oncoproteins. Therefore, CaSki cell line model was used, which consists in metastatic cervical cancer cells infected by HPV-16. Also, a fibroblast cell line was used as a non-carcinogenic model for control. It was possible to identify the correct expression of miR-375, coupled with a decrease in E6 and E7 transcript and protein levels. Furthermore, it was observed that fibroblast viability was not affected, instead observing a decrease in transfected CaSki proliferation and viability. Thus, the application of mcDNA-pri-miR-375 as a possible therapeutic strategy should be more amply studied in the future. In the end, this thesis presents a scientific work that intends to contribute towards the scientific community with useful information for the potential development of new approaches for cervical cancer treatment, through the implementation of two biotechnological platforms. One of the strategies is based on the obtainment of a DNA vaccine, encoding E6 and E7 HPV antigens with the aim of activating two pathways of the immune system, the preventive/humoral and the therapeutic/cellular pathways, allowing the consequent elimination of the antigen-expressing and HPV-infected cervical cancer cells. The second strategy is focused on the obtainment of innovative gene therapy mcDNA vector, encoding pri-miR-375, to silence E6 and E7 HPV oncoproteins, allowing the direct targeting of infected cervical cancer cells, through the re-establishment of tumor suppressor proteins expression or function.O cancro do colo do útero é uma das principais causas de morte entre as mulheres, especialmente em países com acesso limitado a cuidados de saúde e higiene. Ao contrário da maioria dos cancros, que geralmente têm origem em mutações relacionadas com a ação de mutagénicos ou carcinogénicos, o desenvolvimento deste cancro em particular está fortemente associado à infeção pelo vírus do papiloma humano (HPV). Este vírus é responsável pela expressão de oncoproteínas que irão interferir com a regulação do ciclo celular, afetando os mecanismos de reparação e proliferação das células infetadas. As proteínas virais com maior ação oncogénica são as proteínas E6 e E7 do HPV, que por sua vez interferem com a expressão/ação das proteínas supressoras de tumor p53 e pRB, respetivamente. A alteração dos níveis de expressão/ação das proteínas supressoras de tumor pode levar à acumulação de erros irreparáveis nas células que se encontram em constante divisão, resultando na formação de massas celulares cancerígenas altamente proliferativas. Deste modo, identificando a expressão das proteínas E6 e E7 como as principais causas para o desenvolvimento do cancro do colo do útero, várias estratégias têm vindo a ser desenvolvidas no sentido de reverter ou controlar os efeitos associados a esta infeção, perspetivando o desenvolvimento de uma terapêutica efetiva. Nas últimas décadas, estratégias inovadoras como vacinação por DNA ou terapia génica têm sido alvo de grande foco por parte dos investigadores na procura de uma cura para o cancro do colo do útero. Enquanto as vacinas de DNA permitem exercer uma ação tanto terapêutica como preventiva contra a infeção por HPV através da estimulação/mobilização do sistema imunitário, a terapia génica permite aumentar ou silenciar a expressão de proteínas envolvidas no desenvolvimento da patologia. No caso das vacinas de DNA, têm surgido vários estudos com o intuito de direcionar a expressão das proteínas E6 e/ou E7 em células apresentadoras de antigénios, de forma a criar uma resposta imunológica humoral e celular contra estas proteínas. Esta estratégia, para além de ativar o sistema imunitário para o reconhecimento das células que apresentam estes antigénios (ação terapêutica), permite também a produção de linfócitos de memória que poderão ser ativados aquando de uma posterior infeção por HPV (ação preventiva). Por outro lado, a terapia génica tem como intuito atuar diretamente na massa cancerígena, induzindo a expressão de proteínas supressoras de tumor (como o caso das proteínas p53 e pRB) ou silenciando a expressão de proteínas malignas (como o caso das proteínas E6 e E7). No segundo caso existem diversas metodologias pelas quais o mecanismo de silenciamento pode ocorrer, desde a utilização de moléculas sintetizadas quimicamente até à utilização de moléculas naturalmente expressas pelo organismo capazes de regular a expressão de diversas proteínas, como por exemplo os microRNAs (miRs). Estes pequenos RNAs são responsáveis por regular a expressão de diversas proteínas através do seu silenciamento. A expressão de microRNAs tem sido recentemente associada ao cancro, dado que a sua desregulação pode levar a que haja uma maior apetência para desencadear os mecanismos responsáveis pelo desenvolvimento de cancro. Por exemplo, alguns trabalhos descrevem que os níveis de miR-375 estão significativamente diminuídos em amostras de cancro do colo do útero. Diferentes estudos identificaram que o aumento da expressão do miR-375 leva à diminuição dos níveis de expressão das proteínas E6 e E7, aliados ao aumento dos níveis de expressão das proteínas supressoras de tumor p53 e pRB. Em suma, tanto a estratégia de vacinas de DNA como terapia génica apresentam resultados promissores que poderão contribuir para o estabelecimento de uma abordagem terapêutica sólida e eficaz. No entanto existe uma problemática que afeta transversalmente estas estratégias e que se prende com o tipo de vetor utilizado para entregar e expressar a informação genética pretendida. Atualmente, os vetores virais têm vindo a ser amplamente utilizados em detrimento de vetores não-virais, como o DNA plasmídeo (pDNA), devido à eficácia terapêutica diminuída demonstrada pelos últimos, apesar de serem mais seguros e biocompatíveis para o paciente. Esta realidade levou a que vários investigadores se focassem no desenvolvimento de vetores não-virais inovadores que apresentam maior efeito terapêutico. O DNA minicircular (mcDNA) consiste num vetor de DNA não-viral cuja popularidade tem vindo a aumentar incrivelmente nos últimos anos. Este vetor advém da recombinação de uma molécula semelhante ao pDNA convencional, denominada plasmídeo parental (PP). Contudo, o PP apresenta dois locais de recombinação que, após indução, dão origem à recombinação desta molécula em duas moléculas filhas: uma contendo toda a informação procariota necessária para a amplificação do PP em hospedeiros procariotas (miniplasmídeo – mP) e outra contendo toda a informação necessária para a expressão do gene terapêutico em células eucariotas (mcDNA). A eliminação do conteúdo procariota leva a que o vetor de mcDNA apresente um tamanho reduzido, permitindo maior facilidade na internalização das células alvo, uma maior biocompatibilidade, eficácia terapêutica e segurança. Isto porque, as sequências procariotas presentes nos plasmídeos são responsáveis por desencadear respostas imunológicas adversas e consequentemente o silenciamento da expressão do gene alvo, o que fica controlado com a utilização de mcDNA. Tendo em conta a sua tecnologia de produção inovadora, existe a necessidade de desenvolver estratégias adequadas para a obtenção de mcDNA cuja pureza se enquadre nos valores estabelecidos pelas agências reguladoras como a European Medicines Agency (EMA) ou a Food and Drug Administration (FDA). Descrição do trabalho realizado Este trabalho baseou-se, numa primeira fase, no desenvolvimento de uma vacina de pDNA para a produção simultânea das proteínas antigénicas E6 e E7 do HPV, e numa segunda fase, no desenvolvimento de uma estratégia de terapia génica para o silenciamento das proteínas referidas através da obtenção de um vetor de mcDNA capaz de codificar o miR-375. Na abordagem sobre vacinas de pDNA, foram realizados estudos in vitro para perceber a importância que o método de purificação poderá ter na expressão das proteínas antigénicas codificadas na molécula de pDNA, seguindo-se o desenvolvimento de estratégias adequadas para a entrega da vacina em estudo. Para tal, a vacina de pDNA foi purificada por cromatografia de afinidade aplicando suportes monolíticos modificados com ligandos de arginina e posteriormente também foram explorados sistemas de carbonato de cálcio para avaliar a capacidade na entrega da vacina de pDNA às células apresentadoras de antigénio (células dendríticas). Na abordagem de terapia génica, o estudo do silenciamento das oncoproteínas E6 e E7 foi realizado através da construção de um vetor mcDNA codificante para o pri-miR-375. Tendo em conta o carácter inovador do mcDNA, foram desenvolvidos vários estudos no sentido de implementar metodologias adequadas para a sua purificação e caracterização. Para tal, foi explorado pela primeira vez um suporte monolítico modificado com ligandos de cadaverina, no sentido de isolar mcDNA na isoforma superenrolada (sc) de outras isoformas e constituintes bacterianos, bem como de resquícios do seu precursor PP presentes na amostra. Por outro lado, também foi explorada a cromatografia de filtração em gel para a purificação desta molécula através da utilização da matriz Sephacryl SF-1000. Além disso, foi implementada pela primeira vez uma metodologia analítica, baseada em cromatografia com o monolito modificado com cadaverina, para a avaliação do conteúdo de mcDNA presente em amostras simples e complexas. Por último, a avaliação da potencial ação terapêutica deste vetor foi iniciada tendo por base a transfeção de células CaSki, uma linha celular modelo para o cancro do colo do útero. Principais resultados alcançados Este trabalho foi realizado com duas perspetivas diferentes para o tratamento do cancro do colo do útero, considerando nomeadamente as vacinas de DNA e terapia génica. Primeiramente, no que concerne às vacinas de DNA, o estudo de purificação da vacina de pDNA por cromatografia de afinidade permitiu perceber que a estratégia utilizada contribui significativamente para a eficiente transfeção e expressão do gene codificado na respetiva molécula de pDNA. A utilização de um monolito modificado com ligandos de arginina, comparativamente à utilização de estratégias comercialmente disponíveis, permitiu obter um maior conteúdo da isoforma sc presente na amostra final da vacina de DNA, contribuindo para uma maior expressão das proteínas alvo. Posteriormente, um monólito com ligandos de arginina acoplados a um braço espaçador foi desenvolvido com o intuito de melhorar a acessibilidade dos ligandos, em comparação ao método de purificação previamente estabelecido, e assim melhorar a estratégia de purificação usada para a vacina de pDNA. Verificou-se que a capacidade de ligação da estratégia com braço espaçador é menor do que sem braço espaçador, provavelmente devido à ocupação de uma área maior pelo braço espaçador. Contudo, observou- se um aumento da pureza em condições de carregamento devido à eluição de isoformas não funcionais durante este passo, um fenómeno conhecido como sample displacement. Também se verificou que o desenvolvimento de nanossistemas compostos por carbonato de cálcio permitiu a encapsulação do pDNA e a transfeção de células dendríticas, não se revelando citotoxicidade para este tipo de sistemas. No que diz respeito ao estudo para potencial aplicação em terapia génica, foi inicialmente realizada a construção e produção do vector mcDNA contendo o gene de interesse, pri-miR-375, sendo posteriormente avaliadas duas estratégias diferentes para a purificação do mcDNA. Inicialmente, foi preparado um suporte cromatográfico monolítico modificado com ligandos de cadaverina em colaboração com a empresa BIA Separations, Eslovénia. Este suporte foi explorado pela primeira vez em cromatografia e a sua utilização na purificação da isoforma sc de mcDNA permitiu uma recuperação de 78,6% desta molécula, acoplada a uma pureza de 98,4%. Estes resultados foram alcançados através da estudo da influência do pH nas condições de ligação e eluição e explorando gradientes por passos com aumento da concentração de NaCl. Estes valores revelaram-se bastante promissores considerando as estratégias implementadas até à data na purificação de mcDNA. Adicionalmente, também foi explorada a cromatografia de filtração em gel através da utilização da matriz Sephacryl SF-1000, no sentido de se poder aumentar a quantidade de amostra de lisado injetada, e consequentemente a quantidade de mcDNA purificada por ensaio. Esta estratégia baseou-se na utilização de uma coluna cromatográfica com 60 cm de altura e 121 mL de matriz aliada a um gradiente isocrático com uma concentração mínima de NaCl, de forma a impedir ligações inespecíficas à matriz. Após a injeção de 2 mL de uma amostra de lisado de mcDNA, foi possível obter-se uma recuperação de 66% de mcDNA sc, com uma pureza de 98,35%. Apesar de esta estratégia ter permitido aumentar cerca de 12 vezes a quantidade de mcDNA puro obtido por ensaio em relação à metodologia anteriormente estudada, o tempo de cada ensaio foi 8 vezes superior ao tempo gasto com o monolito modificado com cadaverina, sugerindo que a seleção do método de purificação deverá ser de acordo com o objetivo final. Desta forma, foram desenvolvidas e caracterizadas duas estratégias de purificação de mcDNA sc, aplicando uma simples estratégia cromatográfica, sem implicar modificações genéticas específicas na molécula de PP. Estes resultados reforçam a versatilidade destas estratégias de purificação e potencial aplicação a qualquer tipo de mcDNA, independentemente do seu tamanho e constituição nucleotídica. Contudo, a necessidade de implementar uma metodologia analítica que permita quantificar o conteúdo de mcDNA sc de forma rápida, economicamente vantajosa e eficaz levou ao desenvolvimento e validação de um método cromatográfico analítico com o monolito modificado com cadaverina. Assim, foi estabelecida uma estratégia por passos com o aumento da concentração de NaCl durante cerca de 40 minutos para permitir a eluição de todas as espécies da coluna, capaz de quantificar a concentração de mcDNA sc presente numa amostra complexa ou pura, num intervalo de 1-25 μg/mL. A validação deste método passou pela avaliação da sua linearidade, precisão, exatidão e reprodutibilidade de acordo com as normas estabelecidas para o efeito. Para além disso, a utilização de diferentes pares de mcDNA-PP, de composição variada, permitiu observar a robustez deste método, dado que apenas pequenas alterações deverão ser feitas ao gradiente de forma a permitir a quantificação de diferentes moléculas de mcDNA. Por último, de forma a estudar o potencial do miR-375 como possível tratamento do cancro do colo do útero, estudos in vitro foram realizados para avaliar o efeito do vetor mcDNA-miR-375 na expressão das oncoproteínas E6 e E7. Para tal, foi utilizado o modelo de células CaSki, que consiste em células metásticas do cancro do colo do útero infetadas com HPV-16. Por outro lado, uma linha celular de fibroblastos foi utilizada como controlo não cancerígeno. Inicialmente foi verificada a expressão correta de miR-375, acompanhada de uma diminuição da expressão de E6 e E7, tanto a nível de transcritos como de proteína, comparando as células cancerígenas transfetadas com mcDNA com as mesmas células não transfetadas. Além disso, verificou-se que este vetor não afetou a viabilidade celular dos fibroblastos, apesar de nas células CaSki se ter verificado uma diminuição da proliferação celular ao longo do tempo assim como da viabilidade celular das mesmas. Estes resultados são indicativos que a utilização de vetor de mcDNA-miR-375 pode ser proposta como uma possível estratégia terapêutica que deverá ser mais explorada no futuro. Assim, esta tese pretende contribuir junto da comunidade científica com informação útil para o potencial desenvolvimento de novas abordagens para o tratamento do cancro do colo do útero, através da implementação de duas plataformas biotecnológicas. Uma das estratégias baseia-se no desenvolvimento de uma vacina de pDNA que codifica para os antigénios E6 e E7 do HPV com objetivo de ativar as duas vias do sistema imune, a via preventiva/humoral e principalmente a via terapêutica/celular, possibilitando consequentemente a eliminação das células do organismo que expressarem estes antigénios. A segunda estratégia tem como foco a obtenção de um vetor inovador de terapia génica, o mcDNA que codifica para o pri-miR-375 no sentido de silenciar as oncoproteínas E6 e E7 do HPV, permitindo uma ação direta sobre as células cancerígenas do colo do útero, por reposição da expressão ou função de proteínas supressoras de tumor.; ; ; ;

Supporting childbirth knowledge acquisition and decision-making through digital communication technology: the research design of an ongoing study following a mixed-method approach

This paper describes the research design of an ongoing study that overlaps three main fields: technology, health, and social science. This transdisciplinarity approach naturally brings challenges to the methodological plan, which this paper presents, and aims to guide the creation, validation and evaluation of a digital decision aid, and its comparison to a paper-based solution. Through the data collection from different natures, it is expected to be possible to understand the different sources, channels and formats of content that can contribute for childbirth knowledge acquisition; if communication can be facilitated between expectant parents, health care professionals, and childbirth educators; and ultimately, if the tool could provide a mean to create a document regarding birth preferences.publishe

Estimulação nervosa eléctrica transcutânea (TENS) no tratamento da disfunção temporo-mandibular

Tese de mestrado, Medicina Dentária, Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina Dentária, 2012As modalidades eléctricas apresentam uma opção adicional no tratamento da Disfunção Temporo-Mandibular (DTM). Esta dissertação visa esclarecer o mecanismo e eficácia clínica de uma dessas modalidades, a Estimulação Nervosa Eléctrica Transcutânea (TENS). A TENS é utilizada para modulação da dor e melhoria de sintomas de DTM. Vai permitir reduzir a actividade eléctrica em repouso dos músculos mastigatórios de pacientes com esta patologia, bem como reduzir a dor através da estimulação de fibras nervosas mielinizadas de largo diâmetro (Aβ e Aα), que, explicado pela teoria do controlo-portão, inibem a transmissão do impulso nociceptivo nas fibras aferentes não mielinizadas de pequeno diâmetro (Aδ e C). A sua acção pode, também, ser explicada pela teoria da libertação de endorfinas endógenas induzida pela estimulação. Na revisão sistemática efectuada conclui-se que a TENS é eficaz na redução da dor, bem como no aumento da amplitude de abertura bucal em pacientes com DTM. No entanto, os estudos analisados carecem de alguma informação e de seguimento dos pacientes, pelo que não é possível inferir da eficácia da TENS a longo prazo.Electrical modalities represent an aditional option in the treatment of Temporo-Mandibular Disfunction (TMD) patients. This paper aims to clarify the mechanism and clinical efficacy of this modality, Transcutaneous Electrical Nerve Stimulation (TENS). TENS is used for modulation of pain and improvement of TMD symptoms. It will allow to reduce the electrical activity of the masticatory muscles at rest in patients with this disease, as well as reduce the pain by stimulating myelinated large diameter nerve fibers (Aβ and Aα), which, explained by the gate-control theory, inhibit impulse transmission in the nociceptive afferent unmyelinated small diameter fibers (Aδ and C). Its action may also be explained by the theory of endogenous endorphins release induced by stimulation. In the systematic review conducted it was concluded that TENS is effective in reducing pain, as well as increasing the amplitude of the mouth opening in TMD patients. However, the studies reviewed lack some information and monitoring of patients, so it is not possible to infer the effectiveness of TENS in the long term

Invented spelling and perspectives on spelling development : the necessity of an integrated cognitive model

There are several models about the mechanism that make pre-school children evolve regarding the quality of their invented spelling. Ehri's teorical perspective (1997) describes the development of children's spelling skills in terms of their increasing ability to map sounds of words to phonetically appropriate letters. According to this perspective, written language is conceived as an instrument for translating oral language and phonological awareness determines the precision of invented spelling. This model neglects linguistic variables that might influence children ability to analyse the oral and written language and also does not conceive children's reflection about written code as a factor of evolution. The constructivist perspective from Ferreiro (1988), emphasizes the importance of internal conflict between different criterion about the organization of the alphabetic code. For instance, the repetition of the same vowel in syllabic phonetised writing might cause a conflict in children's thinking with another criterion that they attaint, related with the variation of letters within the written word (e.g. Nunes Carraher and Rego (1984) cited a Portuguese-speaking child who spelled urubu 'vulture' as UUU). This conflict might lead children to analyse syllables in their phonemes and became a source for an alphabetic approach of writing. This and other conflicts are the main factor, from the point of view of this theory, for the evolution of children's conceptions about written language. However those mechanisms are described independently of children ability to analyse oral words or the frequency of words and the articulatory properties of phonemes that integrate those words. On the other hand, Polo, Kessler and Treiman (2005), think that that statistical learning skills exists from an early age. These skills are applied in learning to spell, as in other tasks. This perspective emphasizes that children's writing reflects the characteristics of the input to which they have been exposed as they try to find meaningful patterns in regularities of written language. These regularities give children information about graphical as well as phonological patterns of the language in which they reflected their very early spellings. However, this perspective never analyses the nature of children thinking and how that reflects their approach to written language. It is quite important to create a model that integrates these several contribution. © 2011 by Nova Science Publishers, Inc. All rights reserved.info:eu-repo/semantics/publishedVersio